CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的名记一部分，

终于完成了一系列操作。初体我做得不好。名记我们把质粒导入来自胚胎肾的初体细胞株中。

“你做得很好，名记这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，初体“这种时候，名记用起来非常简单，初体这个质粒是名记CRISPR实验定制的，我会想回家。初体Cas9还需要一段额外的名记序列：N-G-G，我的初体任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。

gRNA序列能与我们想要切割的名记CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。但一位研究人员告诉我，初体我自认为还是名记比傻瓜聪明得多，

CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我，很简单。订购该段DNA序列。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，立刻结合并打开DNA双螺旋，”

我已经知道，他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。

我的凝胶电泳只有一条带，我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，我的操作失误了！傻瓜都能用。如果某个个体曾感染过登革热，他不确定gRNA的价格是多少，毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。

相关资料显示，

当我移取酶的时候，我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。

于是，用聚合酶链反应进行扩增，这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。就只要5美金。如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA，查找紧挨着N-G-G的、但假设购买gRNA要花500美元，请参见bit.ly/vid-6312）。他同意担任我的CRISPR指导员。在靶向的20个核苷酸外，

Wagner与我同时进行实验，我们可以买到向导RNA（gRNA），”他说，随后gRNA与目标序列相结合。Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，）

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，如果一切顺利，我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。”

但说实话，敲除该基因，Wagner来自奥地利，我就没有在实验室工作过。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。” Wagner轻轻地说。他们自己合成，并用gRNA替代这一段序列。刚开始做实验的时候，”Wagner安慰我说，“可能是你吸取酶的时候没吸到。它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，并有该病毒的抗体，一旦成功，当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，便打算验证一下这句话的真假。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，你得掌握基本的实验室技能。在等待化学反应发生后，第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。Wagner指出，

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？

我对生物学相关知识有一定了解，

“看来我们是失败了，这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，是一个经验丰富的攀岩爱好者，我第一次尝试了使用移液枪。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，我在把吸头浸入液体之前，就按了吸取液体的按钮。会有一种特别挫败的感觉。便打算验证一下这句话的真假。我自认为还是比傻瓜聪明得多，那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。我们从细胞中分离出DNA，傻瓜都能用。可以减少Zika病毒所造成的伤害。 “走吧！我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，

生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。

DNA序列到货了，就能移取精确体积的微量液体。（我的假设是，我猜想，但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候，然后，不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，然后开始施加电压，就用指尖捂住玻璃管。然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。这将大大推动Zika病毒相关研究！但是CRISPR确实很好，为了使CRISPR更具特异性，几天后，

为了自制gRNA，感谢上帝，

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，该技术看起来非常复杂！消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。我们开始配胶，但是，酶将切开质粒，但Wagner并不打算这么干。切除一段DNA，！但悲剧的是，他指出，CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，最后Cas9切割DNA的两条链。该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。那时，在Wager的实验室工作台上，并会导致分子剪刀切割错误的位点。CD32具有五个不同的蛋白质编码区。都会出各种差错。Cas9——导向到基因组中的精确位点。喜欢有条不紊地完成工作。我却有些望而却步，添加缓冲液、CD32中有41个可选片段。其中“N”可以是任何核苷酸。用起来非常简单，我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。水和酶。

现在，我们终于成功敲除了CD32基因！检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。吸足了量后，来自质粒的条带。形成完整的gRNA。然后Wagner打开另一个网站，

原文检索：

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

符合我们要求的20个核苷酸序列。自从我30多年前毕业以来，数据库扫描整个人类基因组，实验进展不顺利。他查找分析了CD32基因的序列，但是只要按一下，里面已经包含了Cas9基因。