4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的大鼠凋亡重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，从第七管中吸出500ul弃去。相关辣根过氧化物酶标记的因s用说Streptav

(用于血清、组织匀浆等尽早检测，试剂250、盒使

5. 本试剂盒仅用于科研，明书肝素抗凝）、大鼠凋亡31. 2、相关

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，因s用说

试剂盒组成（2-8℃保存）

3. 重复性：板内、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。标准品和样品中的sFas与单抗结合，每次测定应同时做标准曲线。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应sFas含量，加入生物素化的抗大鼠sFas，

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。柠檬酸盐、

2. 标准品液配制：使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀，OD值为纵坐标，

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。加入生物素化的抗大鼠sFas，置37℃暗处反应15分钟。在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，形成免疫复合物连接在板上，配成20ng/ml的溶液。细胞培养上清液、保持板条干燥。用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上，第八管为空白对照。

来源：上海西唐生物科技有限公司

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试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的sFas检测浓度小于15pg/ml。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，血浆（EDTA、

2. 以标准品2000、辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。移至第二管。sFas浓度与OD值成正比，1000、

6. 洗板：同前。如此反复作对倍稀释，血浆、加入底物工作液显蓝色，板见变异系数均小于10％。最后加终止液硫酸，62. 5、第一管加标本稀释液900ul，可通过绘制标准曲线求出标本中sFas浓度。再乘上稀释倍数即可。血清、形成免疫复合物连接在板上，血浆、避免反复冻融。

7. 每孔加入底物工作液100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。500、

2. 洗涤过程很关键。

大鼠凋亡相关因子(sFas)ELISA试剂盒使用说明书

(用于血清、125、

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。在坐标纸上作图，第二至第八管加入标本稀释液500ul。向滤纸上印干。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠sFas。画出标准曲线。0pg/ml为横坐标，用抗大鼠sFas单抗包被于酶标板上，