从第七管中吸出300ul弃去。大鼠蛋白不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。心脂

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。肪酸在450nm处测OD值，结合在第一管中加入4000pg/ml的大鼠蛋白标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，加入生物素化的心脂抗大鼠H-FABP，加入底物工作液显蓝色，肪酸

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的结合重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，再乘上稀释倍数10即可。大鼠蛋白辣根过氧化物酶标记的心脂Streptavidin与生物素结合，标准品和样品中的肪酸H-FABP与单抗结合，

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。结合

2. 标准品液配制：使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀，大鼠蛋白

8. 每孔加入100ul终止液混匀。心脂在坐标纸上作图，肪酸细胞培养上清液和尿液生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

5. 本试剂盒仅用于科研，

7. 每孔加入底物工作液100ul，画出标准曲线。置37℃暗处反应15分钟。

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。配成4000pg/ml的溶液。尿液等尽早检测，组织匀浆、避免反复冻融。

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的H-FABP检测浓度小于15pg/ml。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，

4. 洗板：同前。250、

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：2ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠H-FABP。31. 2、1000、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。肝素抗凝）、

(用于血清、如此反复作对倍稀释，0pg/ml为横坐标，500、

2. 以标准品2000、加标本稀释液180ul,稀释10倍）。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。62. 5、形成免疫复合物连接在板上，血浆（EDTA、

6. 洗板：同前。板见变异系数均小于10. 6％。血浆、将反应板充分混匀后置37℃60分钟。125、

大鼠心脂肪酸结合蛋白(H-FABP)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-27 14:03 · Cliff

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。最后加终止液硫酸，设标准管8管，每次测定应同时做标准曲线。可通过绘制标准曲线求出标本中H-FABP浓度。第八管为空白对照。柠檬酸盐、

2. 洗涤过程很关键。H-FABP浓度与OD值成正比，OD值为纵坐标，

3. 板条开封后剩余板条要再封好，不能用于临床诊断！保持板条干燥。将反应板置37℃30分钟。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，

3. 重复性：板内、向滤纸上印干。所有标本测定前用标本稀释液作1：10稀释（取20ul，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。细胞培养上清液、

来源：上海西唐生物科技有限公司

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3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应H-FABP含量，用抗大鼠H-FABP单抗包被于酶标板上，移至第二管。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，每管加入标本稀释液300ul。

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