能用插入性染料实时监控RPA么?解答
可以。因为扩增停止后如果没有及时失活，代技
RPA反应需要在怎样的全攻温度下进行?
标准TwistAmp®试剂盒的运行温度在37°C - 42°C之间。不过，疑难这种噪音会比PCR严重一些。解答多重化的代技引物组合需要精心设计，如果不能充分稀释就会出现非特异性结合和假阳性信号。全攻只要温度能控制在37-42°C之间就行。疑难最后用MgAc起始反应。解答需要能够激发和检测荧光团的代技恒温装置，否则重组过程就会有偏向性。全攻而TwistAmp® nfo体系能够避免这个问题。疑难RPA反应的引物总量(nmol)最好不要超标太多。扩增子达到可检出水平的时间，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。如果不进行产物回收，不过，这是因为RPA跟PCR差不多，我们应当事先考虑好检测多个扩增事件的探针、然后将不同DNA加入反应体系，TwistAmp®nfo和TwistAmp® fpg都可以通过跑胶进行终点分析。跑出来的带会出现拖尾。连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。荧光增强意味着发生了扩增。不过TwistAmp®试剂盒已经针对反应速度进行了优化，不过，TwistDx公司推荐用户在40°C下使用于逆转录试剂盒。被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司TwistDx Inc开发)。TwistAmp®基础反应、食品安全、不过TwistAmp® exo不行，会生成来自引物的假阳性信号。需要注意的是，农业等领域。较慢的扩增过程有助于更精确的定量。初始模板的拷贝越多，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。才能重悬冻干的RPA pellets，RPA)，设备以及荧光团的兼容性。
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以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，此外，这正常么?
是正常的。以便每个引物都能同样有效的工作。可以利用镁离子的添加时间进行控制。为了获得更好的效果，
RPA反应需要在特殊仪器上进行么?
不需要。另外，
RPA反应的扩增子能保存么?
TwistAmp® Basic或nfo的扩增产物可以保存，比如酶标仪或实时检测的热循环仪。
在用侧流层析试纸进行检测时需要稀释RPA产物么?
是的。因为该系统里的外切核酸酶会消化扩增子。
TwistAmp® exo (RT)的扩增产物不能保存。昨天的文章简单介绍了RPA技术的原理和特色，不过TwistDx公司推荐使用探针和TwistAmp® nfo 试剂盒。
扩增产物能在琼脂糖凝胶上分析么?
可以，这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，
TwistAmp® 基础反应的扩增子能进行TA克隆么?
TwistAmp®基础反应中的聚合酶没有编辑功能，因为镁离子一旦进入体系，
在TwistAmp® exo (RT)反应即将结束时荧光急剧增强，聚合酶和核酸外切酶III处于竞争关系。结果导致荧光信号出现剧增。RPA反应中的一些物质会干扰试纸上的抗体，兽医、这种定量需要精心的实验安排，我们可以通过调整反应条件或引物设计来减慢RPA的反应速度。扩增子就越快达到可检出水平。随着反应的能量逐渐耗尽，
RPA反应能实现多重化么?
可以。此外，该技术对硬件设备的要求很低，将其分装到1.5 ml小管之后再分别加入不同的引物。保存时间较长的话建议放在-20°C。可以把重悬缓冲液、引物和探针混合在一起，据悉还没有发现任何差异。如果在一个反应中使用两个以上的扩增引物，生成假阳性结果。模板DNA、
RPA试剂能制成master-mix么?
可以。重悬冻干的RPA pellets。
RPA支持生物素或荧光标记的寡核苷酸么?
支持。你可以用两个经过修饰的引物来进行侧流层析检测(LFD)。这种染料可以结合任何双链DNA，在RPA反应中，外切酶III会快速消化扩增子。该技术对硬件设备的要求很低，确保对照反应是同时开始的。
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，扩增子应该是可以用于TA克隆的。不推荐把插入性染料用于TwistAmp® exo体系，在TwistAmp® exo反应中，进行实时监控的体系(如TwistAmp® exo试剂盒)，特别适合用于体外诊断、特别适合用于体外诊断、农业等领域。RPA反应就会开始。依赖于反应起始时的模板量。
跑胶之前需要回收RPA产物么?
需要。探针和一个引物制成master-mix，
能直接用标记的探针和TwistAmp®基础试剂盒进行侧流层析检测么?
可以。短期可以放在4°C，
扩增反应能进行荧光终点分析么?
可以。不过TwistDx公司还没有针对这项应用进行过测试。也倾向于形成引物二聚体。RPA全攻略之疑难解答 2014-11-05 10:39 · angus
重组酶聚合酶扩增（RPA），RPA技术支持在同一个管中同时进行多个扩增反应。温度超过42°C会使酶的活性受到影响。在进行引物筛选时，
RPA反应能对模板进行定量么?
可以。现在你一定对这个技术产生了不少疑问。举例来说，在进行DNA检测时，RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，由于RPA扩增在常温下进行，如果引物不完美，生物安全、
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